冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒是結(jié)締組織染色中經(jīng)典的一種方法，是顯示組織中纖維的主要方法之一，是膠原纖維染色而經(jīng)典的技術(shù)方法。該法染色原理與陰離子染料分子的大小和組織的滲透有關(guān)，分子的大小由分子量來體現(xiàn)，小分子量易穿透結(jié)構(gòu)致密、滲透性低的組織；而大分子量則只能進(jìn)入結(jié)構(gòu)疏松的、滲透性高的組織。然而，淡綠或苯胺藍(lán)的分子量都很大，因此Masson染色后肌纖維呈紅色，膠原纖維呈綠色或藍(lán)色，主要用于區(qū)分膠原纖維和肌纖維。

 

　　冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒操作注意事項(xiàng)

 

　　1、 切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。

 

　　2、 組織固定起著非常重要的作用，使用不同的固定液可延或縮短染色時(shí)間。

 

　　3、 經(jīng)典 masson 三色染色中，常要求使用試劑（A）染核，也可用 Harris 蘇木精染核，但 Harris 蘇木精染核后切片顏色不夠鮮艷，因?yàn)槿旧康闹饕谟趨^(qū)分膠原纖維和肌纖 維，一般也可以省略該染色步驟。

 

　　4、 試劑（B）的分化時(shí)間應(yīng)該依據(jù)切片厚薄、組織的類別和新舊而定，。

 

　　5、 試劑（E）為 0.2%乙酸水溶液，可使色彩更清晰鮮艷，如果使用量大可自行配制。

 

　　6、 用試劑（F）分化要在鏡下控制，分化到膠原纖維呈淡紅色；纖維呈紅色即可。分化時(shí)間根 據(jù)染色深淺而定，一般 1～2min。

 

　　7、 返藍(lán)液常使用氨水水溶液，亦可自行配制 Scoot 促藍(lán)液或 0.1～1%碳酸鋰水溶液，該 產(chǎn)品森貝伽有售。

 

　　8、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

　　9、 冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒使用場所應(yīng)通風(fēng)，并遠(yuǎn)離火源。

 

　　全組織細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒是設(shè)計(jì)用來標(biāo)記活細(xì)胞的線粒體的，使之帶紅色熒光。本試劑盒使用一種專屬染料，選擇性地在不同膜電位的線粒體中積累。這種線粒體指示劑是一種疏水性復(fù)合物，可以輕易地滲透進(jìn)入活細(xì)胞中，且當(dāng)進(jìn)入細(xì)胞后就被鎖定在線粒體中。這種熒光性線粒體指示劑可以在線粒體中保留很長時(shí)間，因?yàn)樵撝甘緞в心芏ㄎ挥诩?xì)胞的基團(tuán)。

 

　　其關(guān)鍵特征是其染色效率顯著性提高。本標(biāo)記方法十分穩(wěn)定，需要親手操作的地方很少。它可以用于許多熒光研究中，例如微孔板分析，免疫組化和流式細(xì)胞術(shù)。全組織細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒也可以用于多種不同類型的研究中，包括細(xì)胞粘附性、趨化性、多藥物抗性、細(xì)胞活性、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性的研究。本試劑盒提供所有的必需組分和佳細(xì)胞標(biāo)記方法。它適用于增殖型和非增殖型細(xì)胞，也可以用于懸浮和貼壁細(xì)胞。

 

　　疫印跡重要也是后一步就是酶與底物反應(yīng)進(jìn)行檢測，本試劑盒以化學(xué)熒光發(fā)光方法檢測蛋白質(zhì)或核酸類生物大分子。其原理是，蛋白質(zhì)或核酸在電泳后轉(zhuǎn)移到印跡膜上，以一抗及辣根過氧化物酶HRP標(biāo)記的二抗結(jié)合膜上的目的蛋白，或以HRP標(biāo)記的探針直接或間接結(jié)合膜上的核酸。

 

　　冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒是一種旨在通過長波長的熒光染料特異性地聚集在線粒體，并呈現(xiàn)紅色，用于分析和觀察線粒體活性與形態(tài)以及雙重染色或重疊染色定位的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種冰凍切片組織線粒體的形態(tài)觀察、活性探測和定位標(biāo)記。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，活體檢測，分辨率高，操作簡捷，性能穩(wěn)定，滯留持久。

 

　　線粒體是細(xì)胞中重要的細(xì)胞器，其主要功能是提供細(xì)胞內(nèi)各種物質(zhì)代謝所需要的能量。線粒體大量存在于代謝旺盛的細(xì)胞中，如動(dòng)物的心肌，肝，腎等器官和組織的細(xì)胞中。大量制備線粒體就是從這些器官組織中提取，或從組織培養(yǎng)細(xì)胞中提取。在光學(xué)顯微鏡下線粒體呈現(xiàn)為顆粒狀、棒狀或彎曲細(xì)線。線粒體熒光探針，是一種含有硫醇氯甲基基團(tuán)的熒光染料，自由通過細(xì)胞膜，選擇性地聚集在線粒體。它可以對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行直接染色，在580nm波長可以清晰看到被染成紅色的線狀或顆粒小體的線粒體。并可以分析線粒體膜電位，以檢測線粒體活性。

 

　　冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒染色原理：

 

　　1、細(xì)胞核染色的原理：

 

　　蘇木素為堿性天然染料，可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。

 

　　2、細(xì)胞漿染色的原理：

 

　　伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在一定條件下可使細(xì)胞漿著色。細(xì)胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細(xì)胞漿的染色與染液的pH值密切相關(guān)。當(dāng)染液的pH值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(diǎn)以下時(shí)，胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離，則細(xì)胞漿帶正電荷，就可被帶負(fù)電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與胞漿蛋白質(zhì)帶正電荷的陽離子結(jié)合，使細(xì)胞漿著色，呈現(xiàn)紅色。

 

　　3、分化作用：

 

　　冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒染色后，用某些特定的溶液將組織過多結(jié)合的染色劑脫去，這個(gè)過程稱為分化作用，所用的溶液稱為分化液。在HE染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu)，使組織與色素分離而退色。經(jīng)蘇木素染色后，必須用1%鹽酸乙醇分化，使細(xì)胞核過多結(jié)合的蘇木素染料和細(xì)胞漿吸附的蘇木素染料脫去，再進(jìn)行伊紅染色，才能保證細(xì)胞核與細(xì)胞漿染色的分明。

 

　　4、返藍(lán)作用：

 

　　分化之后，冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài)，呈藍(lán)色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色，故分化之后，立即用水除去組織切片上的酸而中止分化，再用弱堿性水使蘇木素染上的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，這個(gè)過程稱為返藍(lán)作用或藍(lán)化作用。另外用自來水浸洗也可使細(xì)胞核返藍(lán)，但所需時(shí)間較長。