冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒操作體會:
1. 控制好染色步驟;
2. 組織固定起著很重要的作用,根據(jù)不同的固定溶液可延長或縮短染色時間;0.2%冰醋酸水溶溶液洗,可使色調(diào)清晰鮮艷;
3. 磷鉬酸水溶溶液對麗春紅、酸性復(fù)紅有分化作用,分化時鏡下控制, 肌纖維和纖維素呈紅色,膠原纖維呈淡粉紅色即可。
冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒廣泛存在于動物、和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并產(chǎn)生H2O2,是生物體中產(chǎn)生活性氧的代謝途徑之一。
測定原理:GOD催化產(chǎn)生H2O2,過氧化物酶在有氧存在時催化H2O2分解產(chǎn)生的氧又將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質(zhì),顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關(guān)系。
是人體內(nèi)zui普遍的、不可缺乏的條件性必需氨基酸,是構(gòu)成蛋白質(zhì)*的氨基酸之一,更是某些細胞培養(yǎng)中zui基本的元素。由于谷氨酰胺不穩(wěn)定的特性,在細胞培養(yǎng)基的整合中,易自發(fā)性分解為谷氨酸和氨離子,而氨離子對細胞的毒性很強,因此,在細胞培養(yǎng)體系中,須密切關(guān)注谷氨酰胺的儲存壽命(SHELF LIFE)和實時監(jiān)測。在谷氨酰胺酶和谷氨酸脫氫酶的雙酶循環(huán)反應(yīng)系統(tǒng)中,L-谷氨酰胺首先發(fā)生脫氨基反應(yīng),產(chǎn)生谷氨酸和氨離子;進一步氨與2-酮戊二酸反應(yīng)再次產(chǎn)生谷氨酸,同時將還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸即測定NADPH(340nm 波長)的濃度變化
冰凍切片細胞色素C氧化酶活性染色試劑盒樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析