蘇木素伊紅染色液試劑盒體外診斷試劑是一種堿性染料,同媒染劑(常用的是三價(jià)的鐵或鋁的鹽)一起使用,能夠使細(xì)胞核染色。蘇木素和氧化蘇木素都沒(méi)有染色能力,但與媒染劑結(jié)合形成色淀(lake),這種色淀具有染色能力。核、染色體、著絲粒、中心體、線(xiàn)粒體、髓鞘等可被染成藍(lán)色以至黑色。與伊紅合用的蘇木素-伊紅雙重染色法是zui基本的一般組織的染色法,蘇木素染色原理如下:
蘇木素和伊紅在組織學(xué)上被經(jīng)常使用,碘液不同,這是一種*染色街。其他常用的含有蘇木素的染色劑有磷鎢酸蘇木素染色劑,也就是磷鎢酸與蘇木素的混合物。蘇木素染色劑經(jīng)常為組織的研究使用。明礬和三價(jià)鐵鹽常常被用作媒染劑,展示核和細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)。這些媒染劑的原理都是形成媒染劑-染料-組織復(fù)合體,從而顯示顏色。
蘇木素染色內(nèi)質(zhì)呈淡藍(lán)黑色,外質(zhì)收縮,剩下部分不著色或色澤更淺。圓形細(xì)胞核呈藍(lán)黑色。居中的核仁呈黑色小圓點(diǎn)。核膜較薄,其內(nèi)側(cè)緣均勻,整齊地排列著一層細(xì)小的染色質(zhì)粒。核仁與核膜之間可見(jiàn)到核網(wǎng)。被吞噬的紅細(xì)胞呈藍(lán)黑色采用蘇木素染色液進(jìn)行免疫染色后的復(fù)染,操作步驟簡(jiǎn)便,操作時(shí)間短??梢圆僮鞑襟E簡(jiǎn)便,操作時(shí)間短或培養(yǎng)細(xì)胞的染色,或與免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光、原位雜交等配合使用。使用蘇木素染色液染色后還可以進(jìn)行免疫染色或其它染料的復(fù)染。
蘇木素伊紅染色液試劑盒體外診斷試劑原理很簡(jiǎn)單,蘇木素染色法也是常用的一種染色方法。木素染色后的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色,細(xì)胞漿呈現(xiàn)粉紅色或紅色。染色液也可以重復(fù)使用,直至認(rèn)為效果不佳時(shí)再換用新的染色液。
1、蘇木素復(fù)染時(shí)間的把握?
(1)蘇木素復(fù)染時(shí)間要看當(dāng)時(shí)的室溫、溶液的新舊、目標(biāo)抗原的定位等情況,一般數(shù)秒-數(shù)分鐘。不過(guò)這個(gè)如果染色不理想可以補(bǔ)救的。即:染色深則分化時(shí)間稍長(zhǎng)些即可;染色淺則再置于蘇木素中染色即可。
(2)鹽酸酒精是分化,氨水是返蘭。作用不同。片子復(fù)染完后流水振洗,然后置于鹽酸酒精中數(shù)秒(一定動(dòng)作要快)后拿出流水振洗,在放入氨水中返蘭即可。
?。?)如果分化的顏色過(guò)淺,可以復(fù)置于蘇木素中染色。
2、
蘇木素伊紅染色液試劑盒體外診斷試劑復(fù)染后氨水返藍(lán)這一步如何做、濃度多少、時(shí)間多長(zhǎng)?
答:返藍(lán)可以用堿性溶液(PBS/NA2HPO4/淡氨水)或45度溫水、冷水藍(lán)化均可。一般藍(lán)化5~10 min。淡氨水有人用50ml自來(lái)水+三四滴的氫氧化銨。
3、DAB顯色時(shí)間如何把握?
?。?)DAB顯色時(shí)間不是固定的,主要由顯微鏡下控制顯色時(shí)間,到出現(xiàn)淺棕色本底時(shí)即可沖洗;
?。?)DAB顯色時(shí)間很短(如幾秒或幾十秒)就出現(xiàn)很深的棕褐色,這很可能說(shuō)明你的抗體濃度過(guò)高或抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng),需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時(shí)間;
(3)此外,若很短時(shí)間就出現(xiàn)背景很深,還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全,需要延長(zhǎng)封閉時(shí)間;
(4)DAB顯色時(shí)間很長(zhǎng)(如超過(guò)十幾分鐘)才出現(xiàn)陽(yáng)性染色,一方面可能說(shuō)明你的抗體濃度過(guò)低或孵育時(shí)間過(guò)短(一抗4度過(guò)夜);另一方面就是封閉時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。