冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒內(nèi)質(zhì)呈淡藍(lán)黑色,外質(zhì)收縮,剩下部分不著色或色澤更淺。圓形細(xì)胞核呈藍(lán)黑色。居中的核仁呈黑色小圓點(diǎn)。核膜較薄,其內(nèi)側(cè)緣均勻,整齊地排列著一層細(xì)小的染色質(zhì)粒。核仁與核膜之間可見到核網(wǎng)。被吞噬的紅細(xì)胞呈藍(lán)黑色采用蘇木素染色液進(jìn)行免疫染色后的復(fù)染,操作步驟簡(jiǎn)便,操作時(shí)間短??梢圆僮鞑襟E簡(jiǎn)便,操作時(shí)間短或培養(yǎng)細(xì)胞的染色,或與免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光、原位雜交等配合使用。使用蘇木素染色液染色后還可以進(jìn)行免疫染色或其它染料的復(fù)染。
冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒操作步驟(僅供參考)
1、涂片:取待檢細(xì)菌,于載玻片中央涂成薄層或者或在載玻片上滴加少許無(wú)菌水,取菌與的水混合均勻,涂成一薄層。
2、干燥:涂片后在室溫下自然干燥,也可在酒精燈上略加溫,使之迅速干燥。
3、固定:手持載玻片一端,標(biāo)本面朝上,在酒精燈的火焰外側(cè)快速來回移動(dòng)3~5次,每次1s,溫度不宜過高,防止菌體蛋白變性,放置待涼后染色。也可以用甲醇或乙醇固定。
4、初染:滴加結(jié)晶紫染色液染色1~2min,清水沖洗去染色液。
5、媒染:滴加Gram碘液,并覆蓋載玻片,室溫放置1~2min,水洗。
6、脫色:滴加脫色液,搖動(dòng)10~30s,直至流下的脫色液不出現(xiàn)紫色時(shí)為止,立即用水沖去脫色液,終止反應(yīng)。
7、復(fù)染:滴加沙黃染色液染色30s~1min,水洗。
8、干燥。
9、鏡檢:置油鏡觀察。
冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒注意事項(xiàng)
1、涂片之前,應(yīng)事先在背面做好圓圈標(biāo)記,以便判斷后續(xù)試驗(yàn)的位置。
2、取細(xì)菌時(shí),應(yīng)注意自我防護(hù),拔或塞試管塞時(shí),應(yīng)將試管口通過火焰略加燒灼,zui后將接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌。
3、加熱固定涂片時(shí),應(yīng)注意玻片勿太靠近火焰,一般要求玻片溫度不超過60℃,以玻片背面觸及手背皮膚不覺過燙為宜。
4、革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握脫色程度,脫色時(shí)間應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)判斷。脫色過度,陽(yáng)性菌可被誤染為陰性菌;脫色不夠,陰性菌可被誤染為陽(yáng)性菌。
5、待檢細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間也會(huì)影響染色效果,陽(yáng)性菌培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)或已死亡或細(xì)菌溶解,都常呈陰性反應(yīng)。
6、上述試劑均對(duì)人體有刺激性,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。