1、人凝血因子Ⅲelisa試劑盒標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉；

　　2、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻；

　　3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘；

　　4、配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用；

　　5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干；

　　6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外；

　　7、溫育：操作同3；

　　8、洗滌：操作同5；

　　9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘；

　　10、人凝血因子Ⅲelisa試劑盒的終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）；

　　11、測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值，測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。